流動相是色譜分析中不可缺少的,它可以是氣體、液體、也可以超臨界流體等。常見的流動相主要有:乙腈-水溶液、乙腈-醋酸水溶液、甲醇-水溶液、乙腈-磷酸水溶液等。關(guān)于流動相的選擇,這里總結(jié)下,流動相的儲存秘訣,以及試劑混合會導致的一些色譜故障,再以及流動相長霉時應該如果處理的問題!
流動相的配制要點要記得:1.配制不含水的有機溶劑類流動相所用量筒應區(qū)分開,必須是干燥的,不得有水。2.流動相的抽濾。含水流動相和不含水流動相的抽濾裝置應區(qū)分開。抽濾不含水的有機溶劑類流動相所用裝置必須是干燥的,不得有水。3.超聲波震蕩,除氣泡。4.使用0.04%的疊氮鈉溶液以防止流動相長菌。
流動相的儲存及標識:將適量抽濾好的流動相倒入流動相專用儲液瓶,潤洗一次后倒入廢液瓶,再將剩余流動相全部倒入專用儲液瓶;填寫《流動相標簽》,并將標簽貼在儲液瓶上。更換流動相時應及時更新《流動相標簽》。流動相效期
不可忽略的步驟:1.加鹽流動相做完實驗沖洗步驟:先用50%純水和50%有機相沖洗,然后逐漸將有機相將低到10%甚至5%,最后用100%有機相沖洗封柱,整個過程1h以上。若是沖洗一晚上,則用5%甲醇以0.1ml/min以下的低流速沖洗。2.10%異丙醇在線沖洗密封墊:10%異丙醇需定期更換,流動相不加鹽時,周期可以設置1min,沖洗0.2min;流動相加鹽時,周期設置1min,沖洗0.5min,最大為0.7min(長期處于最大值會導致蠕動泵磨損)。3. 流動相更換:流動相瓶必須清洗干凈,含水流動相需定期更換避免長菌,純水2天換一次,進樣前和實驗過程中需不定時觀察流動相有無沉淀。4. 流動相瓶清洗:先用酸液浸泡,然后用大量的自來水沖洗,接著用蒸餾水涮3次以上,最后一次用哇哈哈水潤洗。
關(guān)于流動相所用試劑:
溶劑中的雜質(zhì)會導致出現(xiàn)“鬼峰”,特別是梯度解吸時。
溶劑混合產(chǎn)生的問題:
樣品的溶解:
流動相過濾頭產(chǎn)生的問題
緩沖液的使用:使用前必須過濾; 使用后一定要進行清洗 ,以免造成腐蝕、磨損、阻塞:用純水沖洗30-60min(1ml/min),再用甲醇沖洗30min; 易受到細菌和霉菌的影響。注意:不能直接用有機溶劑沖洗。
流動相脫氣的必要性:
更換流動相時的注意事項:更換互溶流動相時注意清洗吸濾頭;更換不互溶流動相時必須用中間過渡液清洗系統(tǒng),例如異丙醇;更換緩沖液時,應用純水過渡;更換流動相后應使用PURGE鍵快速排液。排去殘液或氣泡。
注意緩沖液的pH值與使用的色譜柱匹配:緩沖液必須過濾膜;使用緩沖液期間,用注射器推純水,清洗柱塞桿,延長泵密封墊壽命;分析完后用純水清洗系統(tǒng)。
自動進樣器清洗液:如選擇不當重現(xiàn)性不好;常用1:1的甲醇水或不含鹽的流動相;清洗液必須過濾,經(jīng)常更換;清洗液需對樣品有一定的溶解度;不可用乙腈作為自動進樣器的清洗液。
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